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Ono ging nach Abschluss der Kōchi-Oberschule an das Nihon University College of Art und besuchte Sonntagslehrgänge an der Aoni Coaching School.
Daisuke Ono ist seit 2002 in verschiedenen Anime zu hören, seine erste Hauptrolle folgte 2005 als Yukito Kunisaki in der Fernsehserie Air. Einen großen Bekanntheitsgrad erreichte er 2006 mit der Rolle des Itsuki Koizumi in Die Melancholie der Haruhi Suzumiya. Für die Rollen des Hosaka (Minami-ke) und Kagezaki (Rental Magica) wurde er bei den 2. Seiyū Awards als bester Nebendarsteller erstmals ausgezeichnet, weitere Preise sollten folgen.
Als Sänger hat Ono Vor- und Abspannmusik und Charakter-Songs veröffentlicht, u. a. als Sebastian Michaelis aus Black Butler das Lied Tsuki no Ame (月の雨), oder die Itsuki-Koizumi-Variante von Hare Hare Yukai(ハレ晴レユカイ). Außerdem hat er auch Singles und Alben unter seinem eigenen Namen herausgegeben.